在1962年的纽约市，童年的一场突发事件夺走了彼得·帕克（安德鲁·加菲尔德 饰）的父母生命。多年后，成为高中生的他偶然发现父亲遗留下的公文包，并从叔父本（马丁·辛饰）处得知了一些关于父亲过去的重要线索。出于好奇和对真相的好奇，彼得决定前往奥斯库公司拜访父亲的旧友——科特·康纳斯博士（瑞斯·伊凡斯 饰）。在一次意外中，彼得被一只变异蜘蛛咬伤，回家途中他发现自己逐渐拥有了超乎常人的能力：超人般的身体、敏锐的感知和强大的蜘蛛感应。通过康纳斯博士的帮助，彼得深入了解了自己体内非凡的力量，并开始学习如何驾驭这些力量。与此同时，城市内出现了一名凶恶的反派——蜥蜴人（由杰米·福克斯配音），这迫使彼得不仅要面对自己的内心恐惧，还要勇敢地站出来成为超级英雄“蜘蛛侠”。在这一过程中，彼得不仅要对抗外来的威胁，还要学会如何处理与朋友、家庭的关系。随着故事的发展，彼得逐渐意识到责任与牺牲的真正含义，并决定用这些能力保护他所爱的人和整个城市。
